Guanidine hydrochloride is not only an intermediate in organic compounds such as pharmaceuticals, pesticides, and dyes, but also a strong denaturing agent used in RNA extraction experiments from cells for protein denaturation and refolding. This article summarizes the role of guanidine hydrochloride in protein denaturation and refolding.
1. Guanidīna hidrohlorīds var denature olbaltumvielas .
Olbaltumvielas viegli ietekmē tādi ārēji faktori kā temperatūra un denaturēšanas līdzekļi, izraisot konformācijas izmaiņas, aktivitātes zudumu un patoloģiskas izmaiņas fizikālajās un ķīmiskajās īpašībās . Šo procesu sauc par olbaltumvielu denaturāciju .} guanidīna hidrataturācijas mehānisms var radīt spēcīgu denaturācijas ietekmi, ieskaitot divus denaturācijas mehānismus.
Viens no tiem ir guanidīna hidrohlorīda šķīdināšanas efekts uz hidrofobiskām aminoskābju atlikumiem . Guanidīna hidrohlorīds var sadalīt ūdeņraža saites olbaltumvielu struktūrās, palielināt nepolāro molekulu šķīdību, kas satur aminoskābi, un samazina hidrofobisko mijiedarbību .}} cita mehānisms ir tā, ka hidrofobiskā proteīna vara ir. guanidine hydrochloride to form denatured protein denaturing agent complexes. After removing the complexes, the reaction equilibrium shifts to the right, and the natural state of the protein becomes a complex, ultimately resulting in complete denaturation of the protein. However, the binding between denaturing agents and denatured proteins is very weak, and only high concentrations of denaturing Aģenti var izraisīt pilnīgu olbaltumvielu denaturāciju . Vispārīgi runājot, guanidīna hidrohlorīda izraisītā denaturācija parasti ir atgriezeniska .
2. olbaltumvielu pārlocīšana un olbaltumvielu izšķīšana .
Kad denaturācijas apstākļi ir smagi un noturīgi, olbaltumvielu denaturācija ir neatgriezeniska . pēc dažu denaturētu olbaltumvielu denaturācijas faktoru noņemšanas, tie var automātiski atgriezties dabiskā stāvoklī, ko sauc par olbaltumvielu, kas pārlocīts ., proteīna proteīna, kas satur proteīnu, kas satur proteīnu, kas satur Protein {{}. Olbaltumvielas, kuras ekspresē baktērijas, kas agregē šūnās, veidojot neaktīvas cietas daļiņas bez fiksētas formas un nav ūdens šķīstoši, šķīst tikai tādos denaturēšanas līdzekļos kā urīnviela un guanidīna hidrohlorīds .
Pēc tam, lēnām noņemot denaturēšanas līdzekli, mērķa proteīns tiek atjaunots no tā pilnībā pagarinātā stāvokļa līdz normālai salocītai struktūrai, savukārt reducējošā līdzekļa noņemšana ļauj normāli veidot disulfīdu saites . Parasti guanidīna hydrohloride atkārtošanās process ir 4M un beidzas ar 1. 5M. Šādi ir dažādas metodes:
Atšķaidīšana un renaturācija: tieši pievienojiet ūdens vai buferšķīdumu, lai atšķaidītu šķīdumu, un ļaujiet tam sēdēt nakti, lai izgulsnētu olbaltumvielu ., trūkums ir tāds, ka tilpums palielinās un denaturēšanas līdzekļa atšķaidīšanas ātrums ir pārāk ātrs, padarot grūti kontrolēt . dialīzi vai filtrācijas renatūru, kas ir maza molekula laikā, ka porcija ir maza molekula laikā, ka porcija ir daļa no molekulas, kas ir daļa no molekulas, kas ir daļas molekulu laikā, ka porcija ir daļa no molekulas. dialysis or filtration. The advantage of the denaturing agent concentration gradually decreasing in the denaturing protein solution is that it does not increase the volume. The removal rate of the denaturing agent can be controlled by gradually reducing the concentration of the external permeate, but the process is slow and requires time. Column renaturation: Renaturation is achieved in the Hromatogrāfijas process, kas ir nesen pētīta un veiksmīgi piemērota metode ražošanā ., priekšrocība ir tā, ka hromatogrāfiskai fiksācijai ir zema denaturētu olbaltumvielu adsorbcijas spēja, kas var uzlabot pārlocīšanas un aktivitātes kvalitāti, iegūst ., vienlaikus atgūstot AGENT, kas viegli {7 ir {7, un tas ir {7, lai iegūtu attīrīšanas mērķus, un atgūt.
Proteins are biomolecules related to life, essential substances for maintaining the normal functioning of living organisms, and also the second generation code of life inheritance. The various studies on proteins are also topics of interest to people, and their structural research is crucial for advancing medical progress. The denaturation or refolding of proteins is one of the core issues in life science research. Among them, the denaturing agent guanidine hydrochloride can denature proteins, making it easy to study their structure. During the refolding process, it can dissolve the proteins in the body, and plays an indispensable role in life science research.